Описание
Набор "ГЛИКОГЕМОТЕСТ" предназначен для определения процентного содержания гликогемоглобина ( HbA1c) в капиллярной и венозной крови человека, которое используется для диагностики латентной (скрытой) формы сахарного диабета, для ретроспективной оценки декомпенсации больных сахарного диабета за последние три месяца, оценки состояния больных сахарным диабетом в момент обследования, а также для контроля эффективности лечения больных сахарным диабетом.
Набор рассчитан на проведение 100 определений гликогемоглобина.
Принцип метода
Метод основан на принципе аффинного разделения гликированной и неглики-рованной фракции гемоглобина гемолизата крови.
Используемый в микроколонках набора аффинный сорбент с привитой 4-аминометилфенилбороновой кислотой обеспечивает на первой стадии специфическое связывание гликогемоглобина и его отделение от негликированной фракции. На второй стадии за счет низкого рН раствора происходит переход бороновой кислоты в свободную ионную форму с высвобождением и последующей полной элюцией гликированной фракции гемоглобина.
Измерение оптических плотностей обеих фракций при длине волны 414 нм (в пре-делах 405-420 нм) позволяет рассчитать относительное содержание гликогемоглобина в анализируемой пробе.
После обработки сорбента буферным раствором микроколонка может быть ис-пользована повторно.
Состав набора
1. Пластиковые микроколонки в комплекте, заполненные аффинным сорбентом , содержащим привитую 4-аминометилфенилбороновую кислоту — 5 шт.;
2. Контрольный образец гликированного гемоглобина для афинной хроматографии с известным (в пределах 9-11%) содержанием гликогемоглобина НвА1с — 1 флакон
3. Антикоагулянт (Nа2ЭДТА , 0,1 М; натрия хлорид , 0,9%) — 1 флакон (25 мл);
4. Гемолитик (Тритон Х-100 , 0,1%; натрий азид , 8 мМ) — 1 флакон (25 мл);
5. Буферный раствор (аммоний ацетатный буфер, 1,0 М, рН 8,1± 0,2; натрий азид, 8 мМ) – 4 флакона (110 мл);
6. Раствор уксусной кислоты (уксусная кислота 0,1М, ) — 2 флакона (105 мл).
Аналитические характеристики набора
Диапазон измеряемого содержания гликогемоглобина HbА1с в капиллярной крови человека составляет 4-20 %.
Коэффициент вариации результатов определения — не более 6%.
Правильность метода определяется по контрольным образцам гликогемоглобина с известным содержанием HbA1с.
Нормальные величины содержания гликогемоглобина НвА1с в капиллярной крови здоровых людей составляет от 4,4% до 6,0%.
Время проведения одного анализа — 20-30 минут.
Необходимое оборудование и реагенты
1. фотоколориметр или спектрофотометр, позволяющие проводить измерения при длине волны 414 нм ( или в пределах от 405 до 420 нм), кювета с длиной волны оптического пути 1 см;
2. штатив для пробирок полиэтиленовый;
3. пипетки полуавтоматические одноканальные с переменным или фиксированным объемом со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,02-5,0 мл, аттестованные по значению средней дозы и сходимости результатов пипетирования, ошибка не более 3%;
4. пробирки центрифужные, вместимостью 10 мл, и химические круглодонные, вместимостью 5,0-25,0 мл;
5. холодильник бытовой;
6. бумага лабораторная фильтровальная;
7. вода дистиллированная или деионизированная;
8. раствор перекиси водорода, 6% раствор;
9. спирт этиловый медицинский ректифицированный 70%;
10. перчатки резиновые хирургические.
Приготовление анализируемых образцов
Для анализа используется капиллярная или венозная кровь с ЭДТА.
В пробирку, предназначенную для отбора образцов крови, внести 0,2 мл Антикоагулянта (или 3-4 капли) и 0,2 мл (или 3-4 капли) крови. Перемешать и дать отстояться. Отобрать 0,02 мл эритроцитарной массы ( или 0,01 мл если кровь или образцы отстаивались более 3-х часов) и перенести в пробирку, содержащую 0,2 мл Гемолитика. Перемешать и оставить стоять 5-10 минут или до полного завершения процесса гемолиза.
Образцы крови с антикоагулянтом и гемолизаты могут храниться при температуре 2-8?С в течение 10 дней.
Условия хранения и эксплуатации набора
Набор должен храниться при температуре 2-8°С в течение всего срока годности. Допускается хранение наборов при температуре до 25°С не более 5 сут.
Срок годности набора – 12 мес.
Растворы Антикоагулянта, Гемолитика, Буферного раствора и раствора уксусной кислоты после вскрытия флаконов могут храниться при комнатной температуре в течение 1 года.
Контрольный раствор гликогемоглобина и микроколонки должны храниться при температуре 2-8°С.